中文名稱：流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)技術(shù)服務(wù)
中文別名：流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)技術(shù)服務(wù)
中文別名：流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)技術(shù)服務(wù)
流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)技術(shù)服務(wù)
1、檢測(cè)項(xiàng)目： (1)細(xì)胞周期細(xì)胞 （2）細(xì)胞凋亡 (3)免疫細(xì)胞分型 (4)表面抗原鑒定 (5)細(xì)胞內(nèi)鈣離子檢測(cè) (6)線粒體功能 (7)細(xì)胞分選 2、樣本及來源： 1) 單個(gè)細(xì)胞：1~2×106 個(gè)細(xì)胞左右；來源于人、小鼠、大鼠或其它。 2) 外周血：EDTA或肝素抗凝全血，5ml左右；來源于人、小鼠、大鼠或其它。 說明： 1、 實(shí)驗(yàn)所用的流式細(xì)胞儀為COULTER EPICS XL。 2、 送檢樣本量： 1)、單個(gè)細(xì)胞：1~2×106 個(gè)細(xì)胞左右；來源于人、小鼠、大鼠或其它。 2)、外周血：EDTA或肝素抗凝全血，5ml左右；來源于人、小鼠、大鼠或其它。 3、 用戶需要進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)須提前預(yù)約，同時(shí)說明實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、方法等。一次送檢標(biāo)本數(shù)不少于10個(gè)。如果一次送檢標(biāo)本總數(shù)不足10個(gè)，每個(gè)測(cè)試費(fèi)用為標(biāo)準(zhǔn)收費(fèi)×2。 4、 我公司在正式接受實(shí)驗(yàn)委托一周內(nèi)交付實(shí)驗(yàn)結(jié)果。所提供實(shí)驗(yàn)結(jié)果忠實(shí)于樣本的實(shí)際情況。 5、 用戶須一次性全額預(yù)付實(shí)驗(yàn)費(fèi)。 6、 部分常用熒光探針，如PI等，我公司可免費(fèi)提供，；特殊標(biāo)記物，如CD抗體等，用戶須另行購(gòu)買，也可委托我公司代購(gòu)；用戶所提供抗體應(yīng)可與樣本發(fā)生特異性識(shí)別反應(yīng)。 7、 由用戶提供的樣品或試劑所致的實(shí)驗(yàn)問題由用戶負(fù)責(zé)。 8、 請(qǐng)?jiān)诒碇姓f明檢測(cè)具體要求（可另附頁(yè)），由于填寫資料不詳所致任何問題由用戶負(fù)責(zé)。 9、 請(qǐng)?jiān)谒蜆拥耐瑫r(shí)提供樣本來源及處理方法等信息，樣品檢測(cè)后原則上本公司不負(fù)責(zé)保存。 客戶提供： （1）標(biāo)本:組織、細(xì)胞、全血（抗凝） （2）抗體（熒光素標(biāo)記） PE最強(qiáng)，適用于弱表達(dá)抗原 FITC最便宜，適用于強(qiáng)表達(dá)抗原，適用范圍廣 biotin-avidin不適合 弱抗原的檢測(cè) （3）其他試劑（如Fluo-3） （4）染色試劑盒 附：流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)樣品推薦制備方法： A. 直接標(biāo)記抗體（FITC標(biāo)記抗體）： (1) 、收集1×106個(gè)細(xì)胞，800rpm離心5min，4℃以上冷PBS洗一次。 (2) 、用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘，800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞，800rpm離心5min。 (3) 、用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞，冰上孵育10min，800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個(gè)細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定，待測(cè)即可。 (4) 、用流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。 B. 未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法： (1)、收集2×106個(gè)細(xì)胞，用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次，800rpm離心5min。 (2)、用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min；2ml PBS重懸細(xì)胞，800rpm離心5min； (3)、用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞，冰上放置10min,800rpm離心5min。 (4)、加入飽和劑量未標(biāo)記抗體，冰上放置40min,800rpm離心5min，用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞，800rpm離心5min，洗去未結(jié)合一抗，重復(fù)一次。 (5)、加入熒光標(biāo)記（FITC）標(biāo)記的二抗，冰上避光放置40min后，800rpm離心5min，去上清，PBS洗滌兩次。 (6)、加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞；固定待測(cè)。 (7)、流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。 C.細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品（PI染色）的制備： (1)、待測(cè)樣本制成單細(xì)胞懸液，然后2000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘，棄上清。 (2)、用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定，4℃保存，至少固定18小時(shí)。 (3)、調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升，取1毫升細(xì)胞懸液，用PBS洗三次，細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中，37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。 (4)、PI染液終濃度為50微克/毫升，RNase A終濃度為20微克/毫升。
客服01